VAMP-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402306

Panoramica

VAMP3 codifica la vesicle-associated membrane protein 3 (VAMP-3), una v-SNARE che media gli eventi di fusione di membrana necessari per l’esocitosi costitutiva e regolata. Partecipa al traffico vescicolare tra endosomi di riciclo e membrana plasmatica, supportando il riciclo dei recettori, la secrezione di citochine e la consegna di proteine di membrana durante la migrazione e la polarizzazione cellulare. La funzione di VAMP-3 si interseca con le vie di smistamento endosomiale e di assemblaggio del complesso SNARE, che modellano l’attivazione delle cellule immunitarie e le interazioni ospite–patogeno. Un traffico vescicolare deregolato che coinvolge VAMP3 è stato studiato in contesti quali l’infiammazione, l’alterata dinamica dei trasportatori del glucosio e i cambiamenti associati al cancro nel turnover di membrana e nell’invasione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VAMP-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VAMP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VAMP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VAMP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VAMP-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VAMP3 per lo studio della segnalazione di VAMP-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VAMP3 critici per la funzione di VAMP-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VAMP3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VAMP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VAMP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VAMP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VAMP-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VAMP-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VAMP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VAMP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.