USPL1 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-408809-ACT-2

Il gene umano USPL1 (ubiquitin-specific peptidase-like 1) codifica una isopeptidasi di SUMO che si localizza prevalentemente nei corpi di Cajal e regola il turnover proteico dipendente da SUMO e l’organizzazione nucleare. USPL1 sostiene la biogenesi delle snRNP dello spliceosoma e l’elaborazione dell’RNA controllando la dinamica della SUMOilazione di fattori nucleari, collegandosi così alla regolazione trascrizionale e ai programmi di mantenimento del genoma accoppiati al ciclo cellulare. Un’omeostasi di SUMO deregolata e un’attività alterata di USPL1 sono state associate a fenotipi proliferativi e a vie rilevanti per il cancro, a testimonianza della sensibilità degli hub nucleari di processamento dell’RNA alla funzione delle proteasi SUMO. L’editing mirato di USPL1 consente studi meccanicistici del circuito della via di SUMO, dell’integrità dei corpi di Cajal e di effetti dipendenti dal contesto su splicing, espressione genica e fitness cellulare in sistemi modello umani.

USPL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di USPL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

USPL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus USPL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione USPL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di USPL1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus USPL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da USPL1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via USPL1 nelle cellule tumorali con espressione di USPL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.