USP28 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433446

Panoramica

Usp28 codifica la peptidasi 28 specifica per l’ubiquitina (USP28), un enzima deubiquitinante che modifica le catene di ubiquitina per regolare la stabilità e il turnover delle proteine. USP28 partecipa a processi di controllo qualità e di segnalazione dipendenti dall’ubiquitina che influenzano le risposte al danno al DNA, la progressione del ciclo cellulare e i programmi trascrizionali, controllando l’abbondanza di fattori regolatori chiave. Attraverso queste attività, USP28 è studiata in vie legate alla stabilità del genoma, alla segnalazione di stress e alla proteostasi. Un’alterazione della funzione di USP28 è stata associata a proliferazione disregolata e a contesti di segnalazione oncogenica, rendendola rilevante per studi meccanicistici nella biologia del cancro e in modelli cellulari correlati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO USP28 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Usp28 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Usp28 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Usp28 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina USP28.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Usp28 per lo studio della segnalazione di USP28, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Usp28 critici per la funzione di USP28
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Usp28 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal USP28 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal USP28 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Usp28. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal USP28 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR USP28 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Usp28 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Usp28 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.