USP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424700

Panoramica

Usp2 codifica la ubiquitina-specifica peptidasi 2 (USP2), un enzima deubiquitinante che inverte il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina, contribuendo a modellare la proteostasi e la durata dei segnali. Accorciando le catene di ubiquitina su substrati selezionati, USP2 modula processi quali la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi, le risposte al danno del DNA e la segnalazione infiammatoria, ed è collegata anche alla regolazione di programmi metabolici e circadiani. Un’attività alterata di USP2 è stata associata a fenotipi di crescita deregolata e di adattamento allo stress in modelli sperimentali, rendendola un nodo utile per indagare il controllo dell’omeostasi cellulare da parte del sistema ubiquitina–proteasoma. Nei sistemi murini, la perturbazione di Usp2 è comunemente impiegata per studiare come la deubiquitinazione moduli il crosstalk tra vie di segnalazione nei tessuti e in contesti rilevanti per il sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO USP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Usp2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Usp2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Usp2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina USP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Usp2 per lo studio della segnalazione di USP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Usp2 critici per la funzione di USP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Usp2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal USP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal USP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Usp2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal USP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR USP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Usp2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Usp2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.