USP14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425567

Panoramica

Usp14 codifica per la peptidasi 14 specifica per l’ubiquitina (USP14), un enzima deubiquitinante associato al proteasoma che accorcia le catene di ubiquitina e regola la processazione dei substrati al proteasoma 26S. Modulando il riciclo dell’ubiquitina e il turnover proteico, USP14 influenza la proteostasi, le risposte allo stress e gli output di segnalazione legati alla degradazione ubiquitina-dipendente. Nelle cellule di topo, un’attività alterata di USP14 è stata associata a perturbazioni del mantenimento neuronale e della funzione sinaptica, in linea con l’importanza di una dinamica bilanciata del proteasoma in neurobiologia. USP14 interagisce inoltre con vie che governano il controllo qualità delle proteine e l’omeostasi cellulare, risultando quindi rilevante per studi meccanicistici sulla disfunzione del sistema ubiquitina–proteasoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO USP14 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Usp14 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Usp14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Usp14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina USP14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Usp14 per lo studio della segnalazione di USP14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Usp14 critici per la funzione di USP14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Usp14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal USP14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal USP14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Usp14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal USP14 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR USP14 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Usp14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Usp14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.