UGP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408778

Panoramica

UGP2 codifica la UDP-glucosio pirofosforilasi 2, un enzima citosolico che catalizza la formazione reversibile di UDP-glucosio a partire da glucosio-1-fosfato e UTP, fornendo un nucleotide-zucchero attivato centrale per la biosintesi. L’UDP-glucosio sostiene il metabolismo del glicogeno e contribuisce alle vie di glicosilazione fornendo precursori per la produzione di glicoconiugati e glicolipidi, influenzando il traffico proteico e le interazioni cellula–cellula. Grazie al suo ruolo nel flusso dei carboidrati e nell’omeostasi dei glicani, UGP2 viene spesso studiato in contesti di rimodellamento metabolico, processamento nel RE/Golgi e adattamento allo stress. Le alterazioni nella disponibilità di UDP-glucosio e nei pattern di glicosilazione sono ampiamente rilevanti per meccanismi coinvolti in diverse patologie metaboliche e proliferative, motivando studi funzionali di UGP2 nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UGP2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UGP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UGP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UGP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UGP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UGP2 per lo studio della segnalazione di UGP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UGP2 critici per la funzione di UGP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UGP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UGP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UGP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UGP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UGP2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UGP2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UGP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UGP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.