Plasmide CRISPR/Cas9 KO UGP2 (h): sc-408778

Présentation

UGP2 code l’UDP‑glucose pyrophosphorylase 2, une enzyme cytosolique qui catalyse la formation réversible d’UDP‑glucose à partir de glucose‑1‑phosphate et d’UTP, fournissant ainsi un nucléotide‑sucre activé central pour la biosynthèse. L’UDP‑glucose soutient le métabolisme du glycogène et contribue aux voies de glycosylation en apportant des précurseurs à la production de glycoconjugués et de glycolipides, influençant le trafic des protéines et les interactions cellule–cellule. Par son rôle dans les flux glucidiques et l’homéostasie des glycannes, UGP2 est souvent étudié dans des contextes de reprogrammation métabolique, de maturation dans le RE/Golgi et d’adaptation au stress. Les modifications de la disponibilité en UDP‑glucose et des profils de glycosylation sont largement pertinentes pour des mécanismes impliqués dans diverses pathologies métaboliques et prolifératives, ce qui motive des études fonctionnelles d’UGP2 dans des cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UGP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UGP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UGP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UGP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UGP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UGP2 pour l'étude de la signalisation de UGP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UGP2 essentiels à la fonction de UGP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UGP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UGP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UGP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UGP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UGP2 plasmide HDR (h) et le UGP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UGP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UGP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.