UBE2J1 Plasmide Double Nickase (m): sc-425050-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UBE2J1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il UBE2J1 Double Nickase Plasmid (m) e il UBE2J1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ube2j1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UBE2J1 Antibody (B-6): sc-377002
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UBE2J1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425050-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ube2j1 codifica UBE2J1, un enzima E2 coniugante l’ubiquitina ancorato alla membrana del reticolo endoplasmatico (RE) che collabora con ligasi E3 residenti nel RE per promuovere la degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD) di proteine mal ripiegate o in eccesso. Fornendo ubiquitina ai substrati retrotraslocati dal reticolo endoplasmatico, UBE2J1 contribuisce a mantenere la proteostasi e a sostenere la segnalazione adattativa durante lo stress del RE, inclusa l’interazione con le vie della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR). L’alterazione dei componenti dell’ERAD può modificare l’omeostasi della via secretoria, la segnalazione infiammatoria e la sensibilità allo stress proteotossico, rendendo UBE2J1 un nodo rilevante per studiare i meccanismi che contribuiscono a neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e rimodellamento della proteostasi associato al cancro. La sua attività è inoltre pertinente per indagini sul controllo qualità delle proteine di membrana e sul processamento dell’antigene legato al turnover dipendente dall’ubiquitina.
UBE2J1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ube2j1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ube2j1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ube2j1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ube2j1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.