UBAC2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407388

Panoramica

UBAC2 (ubiquitin-associated domain containing 2) codifica una proteina associata al reticolo endoplasmatico (RE) implicata nel controllo di qualità delle proteine dipendente dall’ubiquitina e nella proteostasi. Grazie alle sue caratteristiche di legame all’ubiquitina e alla sua localizzazione subcellulare, UBAC2 è stata collegata alla regolazione delle risposte allo stress del RE e al turnover delle proteine mal ripiegate, intersecando vie come la degradazione associata al RE (ER-associated degradation, ERAD) e, più in generale, la segnalazione ubiquitina–proteasoma. Studi genetici hanno associato i loci di UBAC2 a fenotipi legati al sistema immunitario, inclusi segnali di suscettibilità riportati in condizioni infiammatorie e autoimmuni, a sostegno della sua rilevanza in immunobiologia. Queste connessioni rendono UBAC2 un bersaglio utile per analizzare come la segnalazione dell’ubiquitina moduli l’adattamento allo stress e stati cellulari associati all’immunità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBAC2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UBAC2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UBAC2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UBAC2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBAC2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UBAC2 per lo studio della segnalazione di UBAC2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UBAC2 critici per la funzione di UBAC2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UBAC2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBAC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UBAC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UBAC2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBAC2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UBAC2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UBAC2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UBAC2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.