UBA52 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423573

Übersicht

Uba52 kodiert ein Ubiquitin–ribosomales-Protein-Fusionsprotein (UBA52), das prozessiert wird und dabei Ubiquitin sowie das ribosomale Protein L40 freisetzt. Dadurch wird die Verfügbarkeit von Ubiquitin mit der Ribosomenbiogenese und der globalen Proteostase verknüpft. Über ubiquitinabhängige Signal- und Abbauwege unterstützt UBA52 den regulierten Proteinumsatz über das Proteasom, beeinflusst zelluläre Stressantworten und trägt zur Kontrolle der Translation bei. Störungen der Ubiquitin-Homöostase und der Ribosomenfunktion sind in vielfältiger Weise relevant für Mechanismen proteotoxischen Stresses, die Zellzyklusprogression und inflammatorische Signalgebung. Da Ubiquitinierung und Translationskontrolle in der Krebsbiologie und in Modellen der Neurodegeneration häufig verändert sind, ist Uba52 ein nützlicher Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie Proteostase die Zellfitness und die Stressanpassung beeinflusst.

Das UBA52 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Uba52-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Uba52-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Uba52 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UBA52-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Uba52-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UBA52-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Uba52-Exone abzielen, die für die UBA52-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Uba52-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UBA52 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UBA52 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Uba52-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UBA52 HDR-Plasmid (m) und UBA52 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Uba52-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Uba52-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.