Tyro3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401412-ACT

Il gene umano **TYRO3** codifica **Tyro3**, una tirosin-chinasi recettoriale della famiglia **TAM** che viene attivata dai ligandi vitamina K–dipendenti **GAS6** e **PROS1** e segnala in associazione a contesti in cui è presente legame alla **fosfatidilserina**. Una volta attivata, Tyro3 regola sopravvivenza, proliferazione e migrazione cellulare tramite vie che includono la segnalazione **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** e **STAT**, e contribuisce all’**efferocitosi** e all’attenuazione dell’immunità innata attraverso un feedback negativo mediato dai TAM. L’attività di TYRO3 influenza l’omeostasi cellulare nei tessuti immunitari e neurali ed è stata associata ad alterazioni della segnalazione infiammatoria e a fenotipi oncogenici in diversi contesti tumorali. Come parte della rete TAM insieme ad **AXL** e **MERTK**, Tyro3 partecipa anche al crosstalk tra recettori che modella le risposte citochiniche, la clearance fagocitica e il rimodellamento tissutale.

Tyro3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TYRO3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tyro3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TYRO3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TYRO3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tyro3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TYRO3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tyro3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tyro3 nelle cellule tumorali con espressione di TYRO3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.