TWIK-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-407263-NIC

Il gene umano **KCNK6** codifica **TWIK-2**, un canale del potassio a due domini del poro (K2P) che contribuisce alla conduttanza di fondo del K+ e aiuta a determinare il potenziale di membrana a riposo e l’eccitabilità di membrana. Modellando l’omeostasi ionica, TWIK-2 influenza l’accoppiamento stimolo–secrezione, la regolazione del volume cellulare e i processi di segnalazione dipendenti dal Ca2+ in cellule eccitabili e non eccitabili. Un’alterata attività dei canali K2P è stata associata a una disregolazione del tono vascolare, della segnalazione infiammatoria e a fenotipi legati alla proliferazione, rendendo **KCNK6** un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul contributo dei canali ionici alle vie cardiometaboliche e immuno-associate. La funzione di TWIK-2 viene comunemente studiata nel contesto di letture elettrofisiologiche, dinamiche della segnalazione intracellulare e analisi di perturbazione a livello di pathway.

TWIK-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNK6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNK6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNK6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNK6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.