tropomodulin 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423427

Panoramica

Il gene murino **Tmod1** codifica la **tropomodulina 1**, una proteina che cappeggia l’estremità “pointed” dei filamenti di actina e che coopera con la tropomiosina per stabilizzare i filamenti e definirne la lunghezza nelle reti citoscheletriche differenziate. Limitando lo scambio di subunità di actina alle estremità pointed, Tmod1 contribuisce all’organizzazione delle miofibrille, all’architettura dell’actina associata alla membrana e al rimodellamento cellulare dipendente dalla tensione. Queste funzioni collocano Tmod1 all’interno di vie che regolano la dinamica del citoscheletro di actina, l’assemblaggio del sarcomero e il controllo della forma cellulare. Una regolazione alterata della stabilità dei filamenti di actina è ampiamente rilevante per studi sulla struttura muscolare e sulla disfunzione contrattile, così come per il contributo del citoscheletro alla motilità cellulare e alla meccanobiologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO tropomodulin 1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tmod1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tmod1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tmod1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina tropomodulin 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tmod1 per lo studio della segnalazione di tropomodulin 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tmod1 critici per la funzione di tropomodulin 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tmod1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal tropomodulin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal tropomodulin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tmod1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal tropomodulin 1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR tropomodulin 1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tmod1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tmod1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.