TRIP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423499

Panoramica

Traip codifica TRIP, una ligasi E3 dell’ubiquitina che si lega a PCNA e svolge un ruolo nella manutenzione del genoma accoppiata alla replicazione del DNA. TRIP contribuisce alla stabilità della forcella replicativa e coordina risposte dipendenti dall’ubiquitina al danno al DNA, favorendo la risoluzione dello stress replicativo e la preservazione dell’integrità cromosomica. Nelle cellule murine, l’attività di TRAIP è collegata al controllo della progressione del ciclo cellulare e della fedeltà mitotica attraverso vie che intersecano la riparazione del DNA e la segnalazione dell’ubiquitina. L’alterazione dei processi regolati da TRAIP è rilevante per studi sui fenotipi di instabilità genomica associati a difetti dello sviluppo e a modelli di biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Traip in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Traip insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Traip a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRIP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Traip per lo studio della segnalazione di TRIP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Traip critici per la funzione di TRIP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Traip per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Traip. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRIP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRIP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Traip per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Traip definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.