Tom20 Plasmide Double Nickase (h): sc-400041-NIC

TOMM20 codifica Tom20, un recettore centrale del complesso traslocasi della membrana mitocondriale esterna (TOM), che riconosce le sequenze di targeting mitocondriale all’N-terminale e avvia l’importazione nei mitocondri delle proteine codificate dal nucleo. Coordinandosi con altri componenti del TOM e con le traslocasi TIM a valle, Tom20 sostiene la biogenesi mitocondriale, l’assemblaggio della catena respiratoria e la proteostasi, influenzando la fosforilazione ossidativa, l’omeostasi redox e la segnalazione apoptotica. Un’alterazione dell’importazione proteica mitocondriale può favorire stress bioenergetico, cambiamenti nella dinamica mitocondriale e l’attivazione dell’immunità innata, associati a neurodegenerazione, disfunzione cardiometabolica e rimodellamento metabolico legato ai tumori. TOMM20 rappresenta quindi un nodo utile per lo studio delle vie di controllo qualità mitocondriale e delle reti di segnalazione sensibili allo stress.

Tom20 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TOMM20 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TOMM20. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TOMM20. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TOMM20 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.