TNP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423464

Panoramica

Tnp2 codifica la transition protein 2 (TNP2), un fattore di rimodellamento della cromatina specifico degli spermatozoi che sostituisce gli istoni durante le fasi tardive della spermiogenesi e facilita la successiva incorporazione delle protamine per una compattazione stabile del DNA. Questa proteina partecipa al programma coordinato di scambio istone‑protamina, sostenendo la condensazione nucleare, l’integrità del genoma e la corretta morfologia della testa dello spermatozoo. L’alterazione di Tnp2 compromette la dinamica di impacchettamento della cromatina e può portare a una maturazione spermatica difettosa e a fenotipi di ridotta fertilità maschile. Come modello, la TNP2 del topo è ampiamente utilizzata per studiare la riprogrammazione epigenetica, lo spegnimento trascrizionale post‑meiotico e la regolazione dell’architettura della cromatina nelle cellule germinali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TNP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnp2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnp2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnp2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TNP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnp2 per lo studio della segnalazione di TNP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnp2 critici per la funzione di TNP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnp2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TNP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TNP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnp2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TNP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TNP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnp2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnp2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.