TMEM132C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431553

Panoramica

Tmem132c codifica TMEM132C, una proteina transmembrana multipasso prevista che si localizza alle membrane cellulari e si ritiene contribuisca all’organizzazione della superficie cellulare e alla segnalazione associata alla membrana. I membri della famiglia TMEM132 sono stati collegati alla regolazione dell’adesione cellulare e della dinamica del citoscheletro, suggerendo un ruolo nell’architettura dei tessuti e nell’omeostasi neuronale o epiteliale. Nei sistemi murini, i pattern di espressione di Tmem132c supportano l’indagine su come le proteine di membrana modulino la connettività cellulare e le risposte allo stress durante lo sviluppo e nella fisiologia dell’adulto. La disregolazione di moduli transmembrana di adesione/segnalazione è spesso oggetto di studio in neurobiologia e nella genetica delle malattie complesse, rendendo TMEM132C un bersaglio utile per l’analisi meccanicistica delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM132C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tmem132c in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tmem132c insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tmem132c a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMEM132C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tmem132c per lo studio della segnalazione di TMEM132C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tmem132c critici per la funzione di TMEM132C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tmem132c per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMEM132C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TMEM132C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tmem132c. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMEM132C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TMEM132C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tmem132c per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tmem132c definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.