TM6SF1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412251-ACT

TM6SF1 (membro 1 della superfamiglia transmembrana 6) è una proteina di membrana multipasso prevista, con un arricchimento riportato nei tessuti metabolici e collegamenti con la gestione dei lipidi e con processi di traffico associati alle membrane. Sebbene il suo meccanismo molecolare resti definito solo parzialmente, TM6SF1 è stata associata a vie cellulari che influenzano l’omeostasi lipidica, inclusi il metabolismo delle lipoproteine e l’organizzazione del sistema endomembranoso rilevante per la funzione degli epatociti. Variazioni o deregolazione dell’espressione di TM6SF1 sono state riportate in dataset collegati a fenotipi metabolici, a supporto dell’indagine sul suo ruolo nella biologia epatica e nell’equilibrio energetico sistemico. Queste caratteristiche rendono TM6SF1 un bersaglio utile per studiare il controllo trascrizionale di programmi legati ai lipidi e la funzione delle proteine di membrana in modelli cellulari umani.

TM6SF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TM6SF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TM6SF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TM6SF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TM6SF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TM6SF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TM6SF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TM6SF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TM6SF1 nelle cellule tumorali con espressione di TM6SF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.