TLX3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405569-ACT

TLX3 (T-cell leukemia homeobox 3) è un fattore di trascrizione homeobox che regola programmi di espressione genica dipendenti dal contesto durante lo sviluppo e la specificazione di linea, con ruoli di rilievo nella differenziazione ematopoietica e neuronale. Legandosi a specifici motivi del DNA tramite il suo homeodominio, TLX3 può rimodellare le reti trascrizionali che influenzano le decisioni sul destino cellulare, il controllo della proliferazione e lo stato di maturazione. Un’espressione deregolata di TLX3 è associata a programmi di differenziazione alterati e a un segnalamento trascrizionale aberrante osservato in modelli di neoplasie ematologiche, rendendolo un nodo utile per lo studio della biologia dei fattori di trascrizione oncogenici. Nei sistemi cellulari, la perturbazione di TLX3 viene comunemente analizzata per mappare i geni bersaglio a valle, gli stati epigenetici e il crosstalk tra vie di segnalazione che governano fenotipi rilevanti per lo sviluppo e la malattia.

TLX3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TLX3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TLX3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TLX3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TLX3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TLX3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TLX3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TLX3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TLX3 nelle cellule tumorali con espressione di TLX3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.