TLR5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401154-ACT

Il gene umano TLR5 codifica il recettore Toll-like 5, un recettore di riconoscimento di pattern (pattern-recognition receptor) che rileva la flagellina batterica e avvia la segnalazione dell’immunità innata a livello della membrana plasmatica. In seguito al legame con il ligando, TLR5 segnala principalmente attraverso l’asse dipendente da MYD88 per attivare le vie di NF-κB e MAPK, promuovendo la trascrizione di citochine e chemochine pro-infiammatorie che modulano le risposte immunitarie mucosali e sistemiche. L’attività di TLR5 influenza la funzione di barriera epiteliale e le interazioni ospite–microbioma, e un’alterata segnalazione è stata associata a fenotipi infiammatori e a una maggiore suscettibilità alle infezioni. Per il suo ruolo centrale nel riconoscimento dei patogeni e nel mantenimento del tono immunitario, TLR5 è frequentemente studiato in immunologia, microbiologia e in modelli cellulari focalizzati sull’infiammazione.

TLR5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TLR5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TLR5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TLR5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TLR5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TLR5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TLR5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TLR5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TLR5 nelle cellule tumorali con espressione di TLR5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.