TLR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402458-ACT

Il gene umano TLR1 codifica il recettore Toll-like 1, un recettore di riconoscimento dei pattern che eterodimerizza con TLR2 per rilevare lipopeptidi batterici triacilati e altri ligandi microbici sulla superficie cellulare. Una volta attivato, TLR1 trasmette il segnale attraverso cascate dipendenti da MYD88 e IRAK per stimolare le vie di NF-κB e MAPK, inducendo citochine pro-infiammatorie e programmi co-stimolatori che modellano l’immunità innata e adattativa. L’attività di TLR1 influenza l’attivazione dei leucociti, la difesa delle barriere e la maturazione delle cellule presentanti l’antigene, integrandosi con reti più ampie di segnalazione dei recettori Toll-like. La variazione genetica o un’espressione deregolata di TLR1 è stata associata a una suscettibilità alterata alle infezioni e a fenotipi infiammatori, rendendolo rilevante per studi sulle interazioni ospite–microbo e sui meccanismi delle malattie immunomediate.

TLR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TLR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TLR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TLR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TLR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TLR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TLR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TLR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TLR1 nelle cellule tumorali con espressione di TLR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.