TLE1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423412

Panoramica

Tle1 codifica il corepressore trascrizionale TLE1 (Transducin-Like Enhancer of split 1), un membro della famiglia Groucho/TLE che modula l’espressione genica legandosi a fattori di trascrizione associati al DNA e reclutando complessi di regolazione della cromatina. Nelle cellule di topo, TLE1 è un effettore chiave dei programmi trascrizionali responsivi a Notch e Wnt/β-catenina e contribuisce alla specificazione di linea, allo sviluppo neuronale e al mantenimento dell’identità cellulare attraverso la repressione di promotori ed enhancer bersaglio. Integrando segnali provenienti da vie di sviluppo, TLE1 influenza le decisioni di destino cellulare, la tempistica della differenziazione e la proliferazione dipendente dal contesto. Un’alterata regolazione trascrizionale legata a TLE1 è oggetto di studio in modelli di disregolazione dello sviluppo e di segnalazione oncogenica, in cui l’equilibrio tra le vie Wnt/Notch e la repressione epigenetica risultano perturbati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TLE1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tle1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tle1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tle1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TLE1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tle1 per lo studio della segnalazione di TLE1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tle1 critici per la funzione di TLE1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tle1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TLE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TLE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tle1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TLE1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TLE1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tle1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tle1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.