TLE1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400343-ACT

TLE1 (transducin-like enhancer of split 1) è un corepressore trascrizionale della famiglia Groucho/TLE che modula l’espressione genica interagendo con fattori di trascrizione che legano il DNA e reclutando complessi che modificano la cromatina. È noto soprattutto per il suo ruolo nel modellare i programmi di sviluppo e di specificazione di linea cellulare attraverso la repressione dei geni bersaglio di Wnt/β-catenina e il crosstalk con Notch, TGF-β e altre vie associate alla differenziazione. Influenzando lo stato della cromatina e l’output trascrizionale, TLE1 contribuisce al controllo della proliferazione, delle decisioni sul destino cellulare e dell’omeostasi tissutale. Un’espressione di TLE1 deregolata o un’alterazione del contesto di segnalazione in cui agisce è implicata in programmi trascrizionali oncogenici, e TLE1 è ampiamente studiato come marcatore molecolare e nodo regolatorio nella biologia dei tumori.

TLE1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TLE1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TLE1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TLE1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TLE1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TLE1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TLE1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TLE1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TLE1 nelle cellule tumorali con espressione di TLE1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.