Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TIP120A Double Nickase Plasmid (h): sc-402506-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TIP120A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TIP120A Double-Nickase-Plasmid (h) und TIP120A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CAND1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TIP120A: sc-137055
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TIP120A Double Nickase Plasmid (h) | sc-402506-NIC | 20 µg | $410.00 |
CAND1 (TIP120A) kodiert einen Regulator von Cullin-RING-Ubiquitin-Ligasen, der an nicht neddylierten Cullinen bindet und den Austausch von Substratrezeptor-Modulen fördert, wodurch er den Aufbau und Umbau von CRLs steuert. Über diese Aktivität koordiniert TIP120A die ubiquitinabhängige Proteostase und beeinflusst die Zellzyklusprogression, die Reaktion auf DNA-Replikationsstress sowie den signalabhängigen Abbau wichtiger regulatorischer Proteine. Eine Fehlregulation der CRL-Dynamik und des Gleichgewichts zwischen Neddylierung und Deneddylierung wurde mit genomischer Instabilität und veränderter Wachstumskontrolle in Verbindung gebracht, was CAND1 zu einem relevanten Knotenpunkt in Signalwegen macht, die in der Krebsbiologie häufig gestört sind. Die Funktion von TIP120A wird außerdem im Kontext der proteasomenabhängigen Qualitätskontrolle und Stressanpassung untersucht, bei denen die Substratauswahl durch CRLs zelluläre Phänotypen prägt.
TIP120A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CAND1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CAND1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CAND1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CAND1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.