TBC1D15 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-426147-LAC

Il gene murino **Tbc1d15** codifica **TBC1D15**, una proteina attivatrice della GTPasi Rab (Rab-GAP) contenente un dominio TBC che contribuisce a regolare il traffico di membrana e la dinamica degli organelli. TBC1D15 è stata collegata al controllo della morfologia mitocondriale e dei contatti tra mitocondri e lisosomi, mettendo in relazione il trasporto vescicolare con la mitofagia e con vie più ampie dell’autofagia. Attraverso un traffico Rab-dipendente e il turnover degli organelli danneggiati, TBC1D15 può influenzare il metabolismo cellulare, le risposte allo stress e i programmi di controllo della qualità. La disregolazione della dinamica mitocondriale e dell’autofagia è centrale in molti processi rilevanti per la malattia, inclusi neurodegenerazione, infiammazione e disfunzione metabolica, rendendo **Tbc1d15** un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale TBC1D15 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Tbc1d15 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TBC1D15 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Tbc1d15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TBC1D15. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Tbc1d15 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.