TAO2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402320-ACT

Il gene umano **TAOK2** codifica **TAO2**, una chinasi serina/treonina della famiglia Ste20 che agisce a monte della segnalazione **MAPK**, in particolare nelle vie di risposta allo stress attivate da **JNK** e **p38**. TAO2 contribuisce al rimodellamento del citoscheletro e all’organizzazione dei microtubuli, collegando segnali di stress extracellulari o genotossici a cambiamenti nella morfologia cellulare, nella migrazione e nei programmi di sopravvivenza. Nei neuroni, l’attività di TAOK2 è stata implicata nello sviluppo di dendriti e spine e nella segnalazione sinaptica, a supporto di ruoli nei circuiti neuroevolutivi. Una segnalazione TAOK2 disregolata e variazioni del locus sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e a un’alterata segnalazione della risposta allo stress, rendendolo un nodo rilevante per studi meccanicistici nella biologia dello stress cerebrale e cellulare.

TAO2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TAOK2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TAO2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TAOK2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TAOK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TAO2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TAOK2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TAO2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TAO2 nelle cellule tumorali con espressione di TAOK2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.