Tak1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400364-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Tak1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Tak1 Double Nickase Plasmid (h) e il Tak1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MAP3K7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Tak1 Antibody (C-9): sc-7967
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Tak1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400364-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Tak1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400364-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAP3K7 codifica TAK1 (TGF-β–activated kinase 1), una MAP3K che integra i segnali provenienti da citochine pro-infiammatorie e da recettori di riconoscimento dei pattern per coordinare le risposte allo stress e immunitarie. TAK1 fosforila i complessi MAPK e IKK a valle per regolare le vie di segnalazione di NF-κB, JNK e p38, plasmando programmi trascrizionali che controllano infiammazione, apoptosi e decisioni sul destino cellulare. Nelle cellule umane, l’attività di MAP3K7 influenza la segnalazione dell’immunità innata, l’omeostasi tissutale e le risposte allo stress genotossico o ossidativo, rendendola rilevante per studi sulla disregolazione infiammatoria e sulle reti di segnalazione oncogeniche. La perturbazione genetica di TAK1 è comunemente utilizzata per analizzare il cross-talk tra la segnalazione mediata da TLR/IL-1R/recettore del TNF e la regolazione trascrizionale guidata dalle MAPK.
Tak1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAP3K7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAP3K7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAP3K7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAP3K7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.