synphilin-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-406126-NIC

SNCAIP codifica la sinfilina-1, una proteina citosolica che interagisce con l’α-sinucleina e con molteplici componenti dei sistemi ubiquitina–proteasoma e dell’autofagia, collegandola al mantenimento della proteostasi cellulare. La sinfilina-1 è implicata nelle dinamiche di aggregazione proteica e può modulare la formazione di corpi di inclusione, il traffico vescicolare e le vie di controllo qualità responsivo allo stress. Attraverso associazioni con ligasi E3 dell’ubiquitina e fattori del proteasoma, SNCAIP influenza il turnover delle proteine mal ripiegate e può incidere sull’omeostasi neuronale. Alterazioni della funzione o della localizzazione della sinfilina-1 sono state studiate nel contesto delle sinucleinopatie, in cui la disregolazione della gestione delle proteine e la patologia da aggregati rappresentano temi sperimentali centrali.

synphilin-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SNCAIP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SNCAIP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SNCAIP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SNCAIP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.