survivin Plasmide Double Nickase (h): sc-400205-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- survivin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il survivin Double Nickase Plasmid (h) e il survivin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BIRC5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: survivin Antibody (D-8): sc-17779
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
survivin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
survivin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BIRC5 codifica la survivina, una proteina multifunzionale della famiglia degli inibitori dell’apoptosi che coordina la sopravvivenza cellulare con la progressione mitotica. La survivina è un componente centrale del complesso dei passeggeri cromosomici e regola l’allineamento dei cromosomi, la fedeltà del checkpoint del fuso mitotico e la citochinesi, modulando al contempo l’apoptosi caspasi-dipendente e le risposte allo stress. La sua espressione è strettamente legata al controllo del ciclo cellulare e alla segnalazione del danno al DNA, integrando le vie che governano la proliferazione e la morte cellulare programmata. Un’attività deregolata di BIRC5 è frequentemente associata a soglie apoptotiche alterate e a mitosi aberranti, rendendo la survivina un nodo molecolare ampiamente utilizzato negli studi di biologia tumorale e stabilità del genoma.
survivin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BIRC5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BIRC5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BIRC5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BIRC5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.