SULT2B1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424817-ACT

Il gene murino **Sult2b1** codifica la sulfotransferasi citosolica **SULT2B1**, un enzima che catalizza la solfatazione degli steroli, come il colesterolo e gli ossisteroli, in modo dipendente dal 3′-fosfoadenosina-5′-fosfosolfato (PAPS). Regolando l’equilibrio tra pool di steroli attivi e solfatati, SULT2B1 influenza il metabolismo di steroidi/steroli, l’omeostasi lipidica e nodi di segnalazione collegati a vie di recettori nucleari, inclusa LXR e i relativi programmi trascrizionali. L’attività di Sult2b1 è stata associata alla biologia dei lipidi di barriera nei tessuti epiteliali e a processi immunometabolici che modulano la segnalazione infiammatoria e la differenziazione cellulare. Alterazioni nelle dinamiche di solfatazione degli steroli sono pertinenti per studi su disfunzioni metaboliche, meccanismi legati all’aterosclerosi e rimodellamento tissutale, senza implicare esiti clinici.

SULT2B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sult2b1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SULT2B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sult2b1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sult2b1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SULT2B1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sult2b1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SULT2B1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SULT2B1 nelle cellule tumorali con espressione di Sult2b1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.