Sulfiredoxin Plasmide Double Nickase (h): sc-403023-NIC

SRXN1 codifica la sulfiredossina, una reduttasi ATP-dipendente che ripristina le perossiredossine 2-Cys iperossidate dallo stato di acido solfinico, riattivando così la detossificazione dei perossidi mediata dalle perossiredossine. Attraverso questo ciclo di riparazione, la sulfiredossina contribuisce a mantenere l’omeostasi redox cellulare e supporta processi di segnalazione influenzati dalle specie reattive dell’ossigeno, inclusi programmi di adattamento allo stress che si intersecano con le vie antiossidanti regolate da NRF2. Alterazioni dell’espressione di SRXN1 sono state associate a fenotipi di stress ossidativo e sono state riportate in contesti quali la biologia tumorale, l’infiammazione e la neurodegenerazione, in cui la funzione delle perossiredossine e la capacità di tamponamento redox possono influenzare le decisioni sul destino cellulare. Di conseguenza, SRXN1 è ampiamente studiato per il suo ruolo nella regolazione del metabolismo dei perossidi, dell’ossidazione proteica e delle reti di segnalazione sensibili allo stato redox.

Sulfiredoxin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SRXN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SRXN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SRXN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SRXN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.