Su[fu] Plasmide Double Nickase (m): sc-423973-NIC

Sufu (Suppressor of Fused) codifica un inibitore intracellulare chiave della segnalazione Hedgehog, che frena i fattori di trascrizione GLI e contribuisce a definire le soglie di attivazione della via durante il patterning embrionale e l’omeostasi tissutale. Nelle cellule di topo, Su[fu] regola la processazione di GLI, la localizzazione nucleare e l’output trascrizionale a valle di PTCH1/SMO, collegandosi alla segnalazione dipendente dal ciglio primario e a programmi genici dello sviluppo. L’alterazione della funzione di SUFU è associata ad attività aberrante della via Hedgehog, implicata in malformazioni congenite e processi tumorigeni, rendendo Sufu un nodo ampiamente utilizzato per studiare il controllo della trasduzione del segnale. I modelli incentrati su Sufu supportano anche l’indagine del cross-talk della via con la regolazione del ciclo cellulare, la differenziazione e il mantenimento di cellule staminali/progenitrici.

Su[fu] Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sufu nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sufu. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sufu. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sufu interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.