Su[fu] Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423973

Panoramica

Suppressor of fused (Sufu) codifica la proteina Su(fu), un importante regolatore negativo della segnalazione Hedgehog che limita l’attività dei fattori di trascrizione GLI e contribuisce a controllare i programmi trascrizionali che governano il patterning embrionale, la specificazione del destino cellulare e l’omeostasi dei tessuti. Nelle cellule di topo, SUFU funziona come uno scaffold citoplasmatico che sequestra le proteine GLI e ne coordina la processazione e l’accesso al nucleo, integrandosi con le dinamiche della via Hedgehog dipendenti dal ciglio primario. Alterazioni di Sufu possono spostare l’output della via e l’espressione genica a valle, rendendolo rilevante per lo studio della logica di segnalazione nello sviluppo e dei fenotipi cellulari guidati da Hedgehog. Una funzione alterata di SUFU è stata associata a una segnalazione Hedgehog deregolata in modelli legati a patologie, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per interrogare la via.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Su[fu] (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sufu in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sufu insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sufu a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Su[fu].

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sufu per lo studio della segnalazione di Su[fu], studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sufu critici per la funzione di Su[fu]
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sufu per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Su[fu] CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Su[fu] CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sufu. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Su[fu] Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Su[fu] (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sufu per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sufu definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.