SSTR4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403781-ACT

SSTR4 codifica il recettore della somatostatina 4, un GPCR accoppiato a Gi/Go che lega peptidi della somatostatina per modulare l’attività dell’adenilato ciclasi e la segnalazione a valle cAMP/PKA. L’attivazione del recettore può influenzare la segnalazione MAPK, i flussi di calcio e la regolazione dei canali ionici, plasmando l’eccitabilità neuronale e le risposte secretorie in modo dipendente dal contesto. SSTR4 è espresso in molteplici tessuti con ruoli di rilievo nei circuiti neuroendocrini e sensoriali, dove contribuisce alla regolazione della neurotrasmissione e delle reti di segnalazione infiammatoria. Un’alterata segnalazione dei recettori della somatostatina, incluse le vie associate a SSTR4, è oggetto di studio in disturbi che coinvolgono l’elaborazione del dolore, la neuroinfiammazione e la disregolazione della segnalazione ormonale.

SSTR4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SSTR4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SSTR4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SSTR4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SSTR4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SSTR4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SSTR4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SSTR4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SSTR4 nelle cellule tumorali con espressione di SSTR4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.