SRPK2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403763-NIC

SRPK2 (chinasi 2 specifica per proteine ricche in serina/arginina) è una chinasi a doppia specificità che fosforila i fattori di splicing SR, coordinando l’assemblaggio dello spliceosoma e lo splicing alternativo del pre-mRNA. Attraverso la regolazione del processamento dell’RNA, SRPK2 influenza la progressione del ciclo cellulare, la segnalazione da stress e la diversificazione del proteoma, e può intersecarsi funzionalmente con vie guidate da chinasi che modellano il controllo genico a livello trascrizionale e post-trascrizionale. Un’alterazione dell’attività di SRPK2 è stata collegata in letteratura a programmi di splicing deregolati e a fenotipi proliferativi aberranti o di adattamento allo stress, rendendola un nodo utile per studiare la biologia dell’RNA nel cancro e in altre malattie con difetti di splicing.

SRPK2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SRPK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SRPK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SRPK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SRPK2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.