SPT6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406219-ACT

Il gene umano **SUPT6H** codifica **SPT6**, un fattore conservato associato all’elongazione trascrizionale e alla cromatina, che si lega al CTD fosforilato della RNA polimerasi II e coordina il riassemblaggio dei nucleosomi durante la trascrizione attiva. SPT6 agisce insieme a fattori come **IWS1/ALYREF** per accoppiare l’elongazione alla maturazione co-trascrizionale dell’mRNA, inclusi lo splicing e l’esportazione dell’RNA, contribuendo così alla fedeltà trascrizionale e alla stabilità del genoma. Attraverso la regolazione della struttura della cromatina e della dinamica dell’elongazione, SUPT6H influenza ampi programmi di espressione genica legati all’identità cellulare, alla proliferazione e alle risposte allo stress. Un controllo trascrizionale dipendente da SPT6 deregolato è stato implicato in segnalazioni oncogeniche aberranti e in stati di differenziamento alterati, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sulla “dipendenza” trascrizionale e sulla vulnerabilità epigenetica.

SPT6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SUPT6H senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SPT6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SUPT6H nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SUPT6H, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SPT6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SUPT6H nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SPT6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SPT6 nelle cellule tumorali con espressione di SUPT6H silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.