Sp1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423094-LAC

Sp1 murino (specificity protein 1) è un fattore di trascrizione ubiquitariamente espresso che si lega alle GC-box e coordina programmi trascrizionali basali e inducibili che controllano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA, l’apoptosi e la differenziazione. Attraverso interazioni con coattivatori e regolatori della cromatina, Sp1 modula reti geniche collegate alla segnalazione MAPK e PI3K/AKT, alle risposte allo stress ossidativo e agli output trascrizionali infiammatori. Un’attività alterata di Sp1 è stata associata a proliferazione deregolata, riprogrammazione metabolica ed espressione anomala di geni della matrice extracellulare e delle citochine, rendendolo rilevante per studi di biologia del cancro, neurodegenerazione e patologie immuno-mediate. Nei sistemi modello murini, Sp1 funge da nodo centrale per investigare il controllo trascrizionale di geni “housekeeping” e di geni responsivi agli stimoli in tessuti diversi.

Le particelle di attivazione lentivirale Sp1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Sp1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Sp1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Sp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Sp1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Sp1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.