SP-D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422903

Übersicht

Sftpd kodiert das Surfactant-Protein D (SP-D), ein sezerniertes Collectin, das vor allem von alveolären Typ-II-Zellen und Clara-Zellen produziert wird und zur Homöostase des pulmonalen Surfactants sowie zur angeborenen Immunabwehr an mukosalen Oberflächen beiträgt. SP-D erkennt Kohlenhydratmuster auf Mikroorganismen und apoptotischen Zellen und fördert über lektinabhängige Interaktionen Opsonierung, Agglutination sowie die Modulation der Aktivität von Makrophagen und Neutrophilen. Funktionell greift SP-D in Signalwege ein, die die alveoläre Proteostase, die Signalübertragung inflammatorischer Zytokine und oxidative Stressantworten steuern und damit die Integrität der Atemwegsbarriere prägen. Eine veränderte Sftpd-/SP-D-Aktivität wird mit fehlregulierter Lungenentzündung und -remodellierung in Verbindung gebracht, was sie für die Untersuchung von Mechanismen der akuten Lungenschädigung, von Asthma- und COPD-ähnlichen Phänotypen sowie der Anfälligkeit für respiratorische Infektionen in Mausmodellen relevant macht.

Das SP-D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sftpd-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sftpd-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sftpd nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SP-D-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sftpd-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SP-D-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sftpd-Exone abzielen, die für die SP-D-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sftpd-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SP-D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SP-D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sftpd-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SP-D HDR-Plasmid (m) und SP-D HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sftpd-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sftpd-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.