Snapin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406317

Panoramica

SNAPIN codifica Snapin, una piccola proteina citosolica che si associa ai complessi SNARE e ai complessi di tethering per supportare l’attracco delle vescicole e l’esocitosi regolata, in particolare nei neuroni e nelle cellule neuroendocrine. Snapin è stata collegata al priming delle vescicole sinaptiche, al rilascio di neurotrasmettitori accoppiato al calcio e al traffico correlato a endosomi/lisosomi tramite interazioni che coordinano gli eventi di fusione di membrana. Influenzando la trasmissione sinaptica e il trasporto intracellulare, SNAPIN è spesso studiato in vie rilevanti per la connettività neuronale, la funzione dell’autofagia-lisosoma e la segnalazione responsiva allo stress. Alterazioni del traffico dipendente da Snapin sono state investigate nel contesto dei meccanismi di malattie del neurosviluppo e neurodegenerative, in cui risultano compromessi il trasporto vescicolare e la proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Snapin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SNAPIN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SNAPIN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SNAPIN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Snapin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SNAPIN per lo studio della segnalazione di Snapin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SNAPIN critici per la funzione di Snapin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SNAPIN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Snapin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Snapin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SNAPIN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Snapin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Snapin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SNAPIN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SNAPIN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.