Slit3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402553-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Slit3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Slit3 Double Nickase Plasmid (h) e il Slit3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLIT3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Slit3 Antibody (3C5): sc-293463
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Slit3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402553-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Slit3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402553-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLIT3 codifica Slit3, un segnale guida secreto che trasmette il segnale principalmente attraverso i recettori ROBO per regolare l’orientamento degli assoni, la migrazione neuronale e la definizione dei pattern tissutali. Oltre allo sviluppo del sistema nervoso, SLIT3 contribuisce alla comunicazione cellula-cellula influenzando la dinamica del citoscheletro, la motilità direzionale e l’organizzazione dei tessuti vascolari e connettivi. La segnalazione Slit/ROBO interseca processi legati alle Rho GTPasi e alle adesioni focali, che modellano i programmi di adesione e migrazione in molteplici tipi cellulari. Un’espressione o un’attività di via di SLIT3 deregolata è stata associata a fenotipi di sviluppo alterati ed è stata studiata in contesti che coinvolgono migrazione cellulare aberrante e biologia tumorale.
Slit3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLIT3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLIT3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLIT3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLIT3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.