Slfn5 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-435875-ACT

Slfn5 (schlafen 5) è una proteina murina della famiglia Schlafen implicata nella regolazione della segnalazione immunitaria innata e dei programmi trascrizionali stimolati dall’interferone. Le proteine Schlafen sono comunemente associate al controllo della progressione del ciclo cellulare, del metabolismo dell’RNA e alla modulazione della differenziazione delle cellule immunitarie, collegando Slfn5 a vie che plasmano le risposte infiammatorie e gli stati di proliferazione cellulare. Un’alterata attività delle Schlafen è stata associata a una segnalazione citochinica deregolata e alle interazioni tumore–sistema immunitario, rendendo Slfn5 un utile strumento molecolare per studiare la regolazione immunitaria in modelli di cancro e di malattie infiammatorie. Nei sistemi murini, Slfn5 rappresenta un nodo facilmente interrogabile per analizzare reti geniche guidate dall’interferone, le dinamiche di repressione/attivazione trascrizionale e gli effetti dipendenti dal contesto sulla crescita cellulare.

Slfn5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Slfn5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Slfn5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Slfn5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Slfn5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Slfn5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Slfn5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Slfn5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Slfn5 nelle cellule tumorali con espressione di Slfn5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.