Slfn11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401137-ACT

O SLFN11 humano (membro 11 da família Schlafen) codifica a proteína Slfn11, uma proteína estimulada por interferon que conecta a sinalização imune inata à regulação da replicação do DNA e à estabilidade genômica. A Slfn11 modula as respostas ao estresse replicativo ao influenciar a cromatina e a progressão da forquilha de replicação, moldando assim os desfechos celulares após estresse genotóxico e perturbações no metabolismo de nucleotídeos. A expressão de SLFN11 e sua regulação epigenética têm sido estudadas no contexto da biologia tumoral, em que a atividade alterada de Slfn11 se correlaciona com mudanças na capacidade proliferativa e no envolvimento de vias de resposta a danos no DNA. Como resultado, o SLFN11 é frequentemente investigado em mecanismos de estresse replicativo, programas transcricionais induzidos por interferon e determinantes celulares de sensibilidade a agentes genotóxicos.

Slfn11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLFN11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Slfn11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLFN11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLFN11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Slfn11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLFN11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Slfn11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Slfn11 em células tumorais com expressão de SLFN11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.