Slfn11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401137-ACT

SLFN11 umano (Schlafen family member 11) codifica Slfn11, una proteina stimolata dall’interferone che collega la segnalazione immunitaria innata alla regolazione della replicazione del DNA e alla stabilità del genoma. Slfn11 modula le risposte allo stress replicativo influenzando la cromatina e la progressione delle forcelle di replicazione, plasmando così gli esiti cellulari in seguito a stress genotossico e a perturbazioni del metabolismo dei nucleotidi. L’espressione di SLFN11 e la sua regolazione epigenetica sono state studiate nel contesto della biologia tumorale, dove un’attività alterata di Slfn11 correla con cambiamenti della capacità proliferativa e con l’attivazione delle vie di risposta al danno al DNA. Di conseguenza, SLFN11 viene spesso indagato nei meccanismi dello stress replicativo, nei programmi trascrizionali guidati dall’interferone e nei determinanti cellulari della sensibilità ai genotossici.

Slfn11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLFN11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Slfn11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLFN11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLFN11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Slfn11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLFN11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Slfn11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Slfn11 nelle cellule tumorali con espressione di SLFN11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.