SLC35A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423599

Panoramica

Slc35a2 codifica SLC35A2, un trasportatore di UDP-galattosio residente nel Golgi che importa substrati di zuccheri nucleotidici nella via secretoria per sostenere la galattosilazione di glicoproteine e glicolipidi. Regolando la maturazione dei glicani, SLC35A2 influenza il ripiegamento proteico, il traffico vescicolare, l’adesione cellula–cellula e la segnalazione dei recettori, con effetti a valle su vie che dipendono da una corretta glicosilazione di superficie. L’alterazione del trasporto di UDP-galattosio può modificare l’omeostasi di RE/Golgi e la funzione delle proteine di membrana, influenzando processi quali lo sviluppo neuronale e le interazioni delle cellule immunitarie. Una glicosilazione deregolata collegata a SLC35A2 è stata associata ai disturbi congeniti della glicosilazione e a fenotipi più ampi che coinvolgono lo sviluppo neurocognitivo e la funzione dei tessuti epiteliali, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC35A2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc35a2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc35a2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc35a2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SLC35A2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc35a2 per lo studio della segnalazione di SLC35A2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc35a2 critici per la funzione di SLC35A2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc35a2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SLC35A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SLC35A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc35a2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SLC35A2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SLC35A2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc35a2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc35a2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.