SID-2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-407959-LAC

SIDT2 (SID-2) codifica una proteina di membrana lisosomiale/endolisosomiale coinvolta nella gestione degli acidi nucleici lungo la via endocitica, inclusi l’assorbimento e il traffico intracellulare di RNA a doppio filamento extracellulare e di specie oligonucleotidiche correlate. Accoppiando il trasporto di membrana con l’omeostasi lisosomiale, SID-2 è stato collegato a processi quali la maturazione delle vescicole, la funzione autofagia–lisosoma e le vie di sensing dell’immunità innata che rispondono ad acidi nucleici anomali. Alterazioni dell’attività di SIDT2 sono state associate a una disregolazione dell’accumulo lisosomiale e della segnalazione infiammatoria, rendendolo rilevante per studi su neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e interazioni ospite–patogeno. Queste connessioni collocano SIDT2 come un nodo utile per analizzare il traffico endosomiale e le risposte allo stress guidate dagli acidi nucleici nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SID-2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SIDT2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SID-2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SIDT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SID-2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SIDT2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.