Sec61α2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402223-ACT

SEC61A2 codifica la subunità umana Sec61α2, un componente centrale del traslocone Sec61 che media l’importazione co-traduzionale di polipeptidi nascenti nel reticolo endoplasmatico e supporta l’inserimento delle proteine di membrana. Accoppiando l’aggancio del ribosoma alla traslocazione nel RE, Sec61α2 contribuisce alla capacità della via secretoria, alla proteostasi del RE e al coordinamento con la degradazione associata al RE (ERAD) e con la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) durante lo stress proteotossico. Alterazioni della funzione del complesso Sec61 possono influenzare la maturazione proteica, il controllo qualità e l’adattamento cellulare allo stress, processi spesso implicati nella biologia delle malattie proliferative e metaboliche. SEC61A2 è quindi rilevante per studiare la regolazione della capacità di traslocazione nel RE, il rimodellamento del secretoma e le vie di risposta allo stress a valle.

Sec61α2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SEC61A2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sec61α2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SEC61A2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SEC61A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sec61α2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SEC61A2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sec61α2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sec61α2 nelle cellule tumorali con espressione di SEC61A2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.