SCO2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402686

Panoramica

SCO2 codifica un metallochaperone associato alla membrana interna mitocondriale, necessario per la biogenesi della citocromo c ossidasi (complesso IV) attraverso il trasferimento di rame alla subunità COX2 e il supporto all’assemblaggio della catena respiratoria. Tramite il suo ruolo nella fosforilazione ossidativa, SCO2 contribuisce a mantenere il potenziale di membrana mitocondriale, la produzione di ATP e l’omeostasi redox, collegandosi così al metabolismo energetico cellulare e alle risposte allo stress. L’alterazione di SCO2 compromette l’attività del complesso IV e può spostare le cellule verso stati metabolici modificati, influenzando processi quali la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e la sensibilità all’apoptosi. Varianti patogene di SCO2 nell’uomo sono associate a gravi fenotipi di encefalocardiomiopatia mitocondriale e a cardiomiopatia, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio dei meccanismi delle malattie mitocondriali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SCO2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SCO2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SCO2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SCO2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SCO2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SCO2 per lo studio della segnalazione di SCO2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SCO2 critici per la funzione di SCO2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SCO2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SCO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SCO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SCO2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SCO2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SCO2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SCO2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SCO2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.