Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
SAP 97 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400865
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SAP 97 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SAP 97, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SAP 97 Antibody (2D11): sc-9961
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SAP 97 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400865 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DLG1 codifica per la proteina sinaptica associata 97 (SAP97), una proteina scaffold della famiglia delle guanilato chinasi associate alla membrana (MAGUK) che organizza complessi multiproteici a livello della membrana plasmatica. SAP97 regola il traffico e la stabilizzazione di canali ionici e recettori, inclusi i recettori del glutammato di tipo AMPA/NMDA, e li collega al citoscheletro di actina tramite interazioni mediate dai domini PDZ, SH3 e GK. Coordinando le giunzioni cellula-cellula e la segnalazione della polarità, DLG1 influenza la plasticità sinaptica, l’integrità epiteliale e l’organizzazione della sinapsi immunitaria. La disregolazione delle reti di scaffolding associate a DLG1 è stata studiata in relazione a fenotipi neurosviluppo e neuropsichiatrici e a cambiamenti legati al cancro in adesione, migrazione e omeostasi della segnalazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SAP 97 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DLG1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DLG1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DLG1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SAP 97.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DLG1 per lo studio della segnalazione di SAP 97, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DLG1 critici per la funzione di SAP 97
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DLG1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SAP 97 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SAP 97 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DLG1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SAP 97 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SAP 97 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DLG1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DLG1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.