RP1L1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405790

Panoramica

RP1L1 (RP1-like 1) codifica una proteina associata ai microtubuli, arricchita nelle cellule fotorecettrici, dove sostiene l’organizzazione e la stabilità del citoscheletro assonemale all’interno del ciglio connettore e del segmento esterno. Attraverso la sua associazione con i microtubuli e con l’architettura ciliare, RP1L1 contribuisce alla morfogenesi dei fotorecettori, all’allineamento dei dischi del segmento esterno e ai processi di traffico intracellulare essenziali per la fototrasduzione. L’alterazione della funzione di RP1L1 è collegata a degenerazioni retiniche ereditarie, incluse la distrofia maculare e fenotipi correlati, evidenziandone il ruolo nel mantenimento della struttura retinica e dell’integrità della segnalazione visiva. RP1L1 è quindi rilevante per lo studio della regolazione citoscheletrica dipendente dalle ciglia, del trasporto proteico compartimentalizzato e dei meccanismi di vulnerabilità dei fotorecettori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RP1L1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RP1L1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RP1L1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RP1L1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RP1L1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RP1L1 per lo studio della segnalazione di RP1L1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RP1L1 critici per la funzione di RP1L1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RP1L1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RP1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RP1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RP1L1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RP1L1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RP1L1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RP1L1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RP1L1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.