RNMT Plasmide Double Nickase (h): sc-417964-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNMT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNMT Double Nickase Plasmid (h) e il RNMT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNMT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RNMT Antibody (3H3-1D12): sc-517112
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNMT Plasmide Double Nickase (h) | sc-417964-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNMT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417964-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La RNA guanina-7 metiltransferasi (RNMT) è la subunità catalitica del complesso metiltransferasico del cappuccio dell’mRNA che installa il cappuccio N7-metilguanosina (m7G) sui trascritti della RNA polimerasi II. Questa modifica del cappuccio è essenziale per la maturazione co-trascrizionale dell’mRNA, l’esportazione nucleare, l’inizio della traduzione e la protezione dalla degradazione esonucleolitica, collegando l’attività di RNMT al controllo globale dei programmi di espressione genica. La funzione di RNMT si interfaccia con le vie della trascrizione e della maturazione dell’RNA e contribuisce a coordinare la crescita e la segnalazione in risposta allo stress attraverso effetti sulla stabilità dei trascritti e sulla resa traduttiva. La deregolazione del capping dell’mRNA e della traduzione dipendente dal cappuccio è stata associata a stati proliferativi alterati e a firme di espressione genica oncogeniche, rendendo RNMT un nodo utile per studi meccanicistici del metabolismo dell’RNA in contesti rilevanti per la malattia.
RNMT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNMT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNMT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNMT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNMT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.