RIP/Rab Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405836

Panoramica

AGFG1 (RIP/Rab) codifica un ArfGAP con ripetizioni FG che collega il traffico di membrana all’endocitosi mediata da clatrina e allo smistamento endosomiale. RIP/Rab interagisce con componenti della macchina endocitica e contribuisce all’internalizzazione dei recettori, alla gemmazione delle vescicole e al riciclo del carico, mettendo in relazione la dinamica di membrana regolata dalle GTPasi con l’organizzazione del citoscheletro. Attraverso questi ruoli, AGFG1 influenza il turnover della segnalazione e le vie di omeostasi proteica, frequentemente alterate in condizioni di proliferazione e di adattamento allo stress. La disregolazione dei programmi di endocitosi e di traffico che coinvolgono AGFG1 è stata associata a contesti rilevanti per la biologia del cancro e per le interazioni ospite–patogeno, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RIP/Rab (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AGFG1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AGFG1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AGFG1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RIP/Rab.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AGFG1 per lo studio della segnalazione di RIP/Rab, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AGFG1 critici per la funzione di RIP/Rab
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AGFG1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AGFG1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RIP/Rab Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RIP/Rab (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AGFG1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AGFG1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.