Rictor Plasmide Double Nickase (m): sc-429705-NIC

Rictor (rapamycin-insensitive companion of mTOR) è un componente strutturale essenziale (scaffold) del complesso mTOR 2 (mTORC2) nelle cellule di topo, coordinandone l’assemblaggio e il reclutamento dei substrati che consentono la fosforilazione delle chinasi AGC come AKT (Ser473), SGK1 e le isoforme di PKC. Attraverso la segnalazione di mTORC2, Rictor regola la sopravvivenza cellulare, il metabolismo, l’organizzazione del citoscheletro e la migrazione, integrando segnali derivanti dai fattori di crescita e dallo stato nutrizionale. Un’alterata attività di Rictor/mTORC2 è associata a una deregolazione della segnalazione insulinica, a fenotipi proliferativi e invasivi aberranti e al rimodellamento delle risposte allo stress in diversi contesti rilevanti per la malattia. Queste funzioni rendono Rictor un bersaglio chiave per analizzare l’architettura della via PI3K–AKT e i programmi trascrizionali e citoscheletrici a valle nei modelli di ricerca biomedica.

Rictor Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rictor nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rictor. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rictor. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rictor interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.